|
|
ЛАБОРАТОРНАЯ
РАБОТА №9
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ СЕМЯН
- Цель работы:
определить жизнеспособность семян методом окрашивания тканей зародыша.
- Задачи работы:
получить навыки определения жизнеспособности семян с использованием
красителей.
- Пояснение к работе:
под жизнеспособностью семян понимается количество живых семян,
выраженное в процентах от общего числа семян, взятых для анализа. Метод
анализа основан на свойстве ткани зародыша воспринимать окраску
действующих на него красителей. Некоторые красители окрашивают мертвые
клетки, а другие - здоровые. Заключение о жизнеспособности семян
делается по площади, месту и интенсивности воспринятой зародышем
окраски.
- Методом окрашивания
пользуются при анализе семян с длительным семенным покоем (семян кедра,
клена, липы, ореха, вишни, сливы, яблони, рябины, черемухи) или при
необходимости срочного проведения анализа семян. Его применяют и к
быстро прорастающим семенам хвойных пород (сосна, ель, лиственница,
пихта).
- ГОСТом 13066.7-93
установлено использование следующих красителей: раствора индигокармина
(окрашивает мертвые клетки зародыша в синий цвет), йодистого раствора
(окрашивает живые клетки зародышей хвойных пород в сине-серый цвет) и
раствора тетразола (окрашивает живые клетки клена в красный цвет).
- Метод определения
жизнеспособности зародышей семян окрашиванием раствором индигокармина
основан на том, что живые клетки зародыша непроницаемы для раствора,
тогда как мертвые клетки зародыша легко пропускает этот раствор и
окрашиваются.
- Приготовление
раствора: 1 г порошка индигокармина растворяют в 1 л воды и
кипятят в течение 30 минут. Затем раствор фильтруют через
предварительно взвешенный фильтр. Остаток не растворившегося
индигокармина вместе с фильтром взвешивают и по разности весов
устанавливают количество растворившегося индигокармина. После этого в
раствор доливают кипяченую воду до получения концентрации 0,05 % (1 г
на 2 л воды). Раствор хранят в темном месте не более 15 дней.
- Отсчитывают 4 сотни
семян из фракции чистых. Перед извлечением зародышей семена намачивают.
Срок намачивания для различных пород установлен ГОСТом (например семена
кедра намачивают в течение 48 часов). Затем из семян извлекают
зародыши. В число 100 штук семян входят и такие, у которых зародыш
оказался недоразвитым, поврежденным насекомыми, явно загнившим или он
совсем отсутствует. Такие семена относят к категории
нежизнеспособных.
- Зародыши замачивают
в растворе индигокармина в течение 2 часов. Затем краситель сливают,
зародыши промывают и рассматривают.
- К жизнеспособным
относят (для семян кедра, сосны, ели): а) совсем не окрашенные; б)
окрашенные не более, чем на 1/3, начиная от корешка зародыша (рисунок
18);
- При анализе
жизнеспособности семян яблони, рябины и других пород: а) совсем не
окрашенные семена (рисунок 19), б) имеющие окрашенные пятна на
семядолях, не превышающие 1/3 их поверхности и расположенные на
противоположной стороне от корешка зародыша; в) с поверхностным бледным
окрашиванием всего зародыша; г) имеющие едва заметную окрашенную точку
на кончике корешка. К нежизнеспособным относятся все остальные.
- Жизнеспособность
семян вычисляют как среднее арифметическое из результатов окрашивания
четырех проб семян и выражают в целых процентах.
- Метод определения
жизнеспособности зародышей семян раствором тетразола основан на
окрашивании им живых клеток. В результате биохимических процессов
внутри живых клеток зародыша образуется нерастворимое вещество -
формазан красного или малинового цвета. Мертвые клетки остаются не
окрашенными.
- Для определения
жизнеспособности зародышей клена (бархатистого, ложноплатанового,
остролистного) применяют 0,5%-й раствор тетразола (5 г на 1 л
кипяченой воды). Окрашивание проводят в темноте в течение 24
ч при температуре 30°С. При слабом окрашивании зародышей этот
срок можно продлить до 48 ч при комнатной температуре.
При окрашивании тетразолом зародышей семян клена к жизнеспособным
относят: а) полностью окрашенные; б) имеющие неокрашенные пятна на
семядолях зародыша, не превышающие 1/3 их поверхности если они удалены
от места прикрепления
корешка;
в) имеющие окрашенные семядоли и бледноокрашенные корешки и наоборот;
г) имеющие едва заметную неокрашенную точку на кончике корешка.
Метод окрашивания йодистым раствором основан на окрашивании крахмала
зародышей йодом.
Рисунок
18 - Зародыши семян сосны обыкновенной - после окрашивания раствором
индигокармина: + жизнеспособные; - нежизнеспособные
Рисунок
19 - Зародыш семян яблони (А) и ясеня (Б) после окрашивания
индигокармином: + жизнеспособные; - нежизнеспособные
- Для приготовления
йодистого раствора в 100 см3 дистиллированной или кипяченой воды
растворяют 1,3 г йодистого калия и 0,3 г кристаллического йода.
- Предварительно
семена намачивают в воде на 18-24 ч и раскладывают на аппарат для
проращивания: семена ели и сосны на 48 ч, семена лиственницы на 72
ч, затем извлекают из них зародыши и выдерживают их в
йодистом растворе в течение 30 мин. К жизнеспособным относят зародыши
семян: а) окрашенные полностью в темный цвет различной интенсивности
(от серого до
черного);
б) зародыши семян, у которых меристема (образовательная ткань) и
корневой чехлик окрашены в серый или черный цвет, а семядоли - в желтый.
К нежизнеспособным относят все другие категории.
- Жизнеспособность
семян вычисляют как среднее арифметическое результатов окрашивания
четырех проб и выражают в целых процентах.
- Ход выполнения
работы:
- 1. Ознакомиться
с пояснением к занятию, ГОСТ 13056.7-93.
- 2. Извлечь зародыши
из семян кедра, стараясь не повредить зародыши (по 100 штук на каждого
студента) и опустить их в раствор красителя.
- 3. По
истечении установленного срока окрашивания зародыши промывают чистой
водой и определяют количество жизнеспособных.
- 4. Результат
анализа заносят в карточку анализа семян.
- Материалы и
оборудование:
- 1.
Замоченные семена кедра (по 100 штук на каждого студента).
- 2.
Бритвенные лезвия, препаровальные иглы, марлечки.
- 3.
Индигокармин (0,05% раствор), тетразол (0,5% раствор) и йодистый
раствор.
- 4.
Посуда для окрашивания семян (чашки Петри).
- 5.
Колба с водой.
- 6.
Схема окрашивания семян.
- 7.
Карточки анализа семян.
- Контрольные вопросы
для самопроверки:
- 1.
Что понимают под жизнеспособностью семян?
- 2.
Какие красители используются для определения жизнеспособности?
- 3. На
каких свойствах ткани основан метод определения жизнеспособности в
зависимости от типа красителя?
|
